צעל קולטור סוויווע אַפעקט צעל פּראָדוקציע

איינער פון די הויפּט אַדוואַנידזשיז פון צעל קולטור איז די פיייקייט צו מאַניפּולירן די גשמיות כעמיע פון ​​צעל רעפּראָדוקציע (ד"ה טעמפּעראַטור, ף, אָסמאָטיק דרוק, אָ2 און CO2 שפּאַנונג) און פיזיאַלאַדזשיקאַל סוויווע (ד"ה האָרמאָנע און נוטריאַנט קאַנסאַנטריישאַן).אין דערצו צו טעמפּעראַטור, די קולטור סוויווע איז קאַנטראָולד דורך די וווּקס מיטל.

כאָטש די פיזיאַלאַדזשיקאַל סוויווע פון ​​קולטור איז נישט אַזוי קלאָר ווי זייַן פיזיש און כעמישער סוויווע, אַ בעסער פארשטאנד פון סערום קאַמפּאָונאַנץ, לעגיטימאַציע פון ​​גראָוט סיבות פארלאנגט פֿאַר פּראָוליפעריישאַן, און אַ בעסער פארשטאנד פון די מיקראָענוויראָנמענט פון סעלז אין קולטור.(ד"ה צעל-צעל ינטעראַקשאַן, גאַז דיפיוזשאַן, ינטעראַקשאַן מיט די מאַטריץ) איצט אַלאַוז זיכער צעל שורות צו זיין געבילדעטער אין סערום-פריי מידיאַ.

1.קולטור סוויווע אַפעקץ צעל גראָוט
ביטע טאָן אַז די צעל קולטור טנאָים זענען אַנדערש פֿאַר יעדער צעל טיפּ.
די קאַנסאַקווענסאַז פון דיוויייטינג פון די קולטור טנאָים פארלאנגט פֿאַר אַ באַזונדער צעל טיפּ קייט פון די אויסדרוק פון אַבנאָרמאַל פענאָטיפּעס צו די גאַנץ דורכפאַל פון צעל קולטור.דעריבער, מיר רעקאָמענדירן אַז איר ווערן באַקאַנט מיט די צעל שורה איר זענט אינטערעסירט אין און שטרענג נאָכפאָלגן די ינסטראַקשאַנז צוגעשטעלט פֿאַר יעדער פּראָדוקט איר נוצן אין דיין עקספּערימענט.

2. פּריקאָשאַנז פֿאַר קריייטינג אַן אָפּטימיזעד צעל קולטור סוויווע פֿאַר דיין סעלז:
קולטור מעדיע און סערום (זען ווייטער פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע)
ף און CO2 לעוועלס (זען ווייטער פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע)
האָדעווען פּלאַסטיק (זען ווייטער פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע)
טעמפּעראַטור (זען ווייטער פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע)

2.1 קולטור מעדיע און סערום
דער קולטור מיטל איז די מערסט וויכטיק טייל פון דער קולטור סוויווע, ווייַל עס גיט די נוטריאַנץ, גראָוט סיבות און כאָרמאָונז דארף פֿאַר צעל גראָוט, און רעגיאַלייץ די ף און אָסמאָטיק דרוק פון דער קולטור.

כאָטש די ערשט צעל קולטור יקספּעראַמאַנץ זענען דורכגעקאָכט מיט נאַטירלעך מידיאַ באקומען פון געוועב עקסטראַקץ און גוף פלוידס, די נויט פֿאַר סטאַנדערדיזיישאַן, מעדיע קוואַליטעט און געוואקסן פאָדערונג געפירט צו דער אַנטוויקלונג פון דעפיניטיווע מידיאַ.די דריי יקערדיק טייפּס פון מעדיע זענען בייסאַל מידיאַ, רידוסט סערום מידיאַ און סערום-פריי מעדיע, און זיי האָבן פאַרשידענע רעקווירעמענץ פֿאַר סערום סופּפּלעמענטאַטיאָן.

2.1.1 יקערדיק מיטל
גיבקאָ צעל קולטור מיטל
רובֿ צעל שורות וואַקסן געזונט אין יקערדיק מידיאַ מיט אַמינאָ אַסאַדז, וויטאַמינס, ינאָרגאַניק סאָלץ און טשאַד קוואלן (אַזאַ ווי גלוקאָוס), אָבער די יקערדיק מעדיע פאָרמיוליישאַנז מוזן זיין סאַפּלאַמענטאַד מיט סערום.

2.1.2 רידוסט סערום מיטל
פלאַש מיט גיבקאָ נידעריק סערום מיטל
אן אנדער סטראַטעגיע צו רעדוצירן די אַדווערס יפעקץ פון סערום אין צעל קולטור יקספּעראַמאַנץ איז צו נוצן סערום-רידוסט מעדיע.רידוסט סערום מיטל איז אַ יקערדיק מיטל פאָרמולע רייַך אין נוטריאַנץ און כייַע-דערייווד סיבות, וואָס קענען רעדוצירן די סומע פון ​​​​סערום פארלאנגט.

2.1.3 סערום-פריי מיטל
פלאַש מיט גיבקאָ סערום-פריי מיטל
סערום-פריי מיטל (SFM) סערקאַמווענט די נוצן פון כייַע סערום דורך ריפּלייסינג סערום מיט צונעמען דערנערונג און האָרמאָנע פאָרמיוליישאַנז.פילע ערשטיק קאַלטשערז און צעל שורות האָבן סערום-פריי מיטל פאָרמיוליישאַנז, אַרייַנגערעכנט די כינעזיש האַמסטער אָוווערי (CHO) רעקאָמבינאַנט פּראָטעין פּראָדוקציע שורה, פאַרשידן כייבראַדאָמאַ צעל שורות, ינסעקט שורות Sf9 און Sf21 (Spodoptera frugiperda), ווי געזונט ווי פֿאַר דער באַלעבאָס פֿאַר ווירוס פּראָדוקציע. (למשל, 293, VERO, MDCK, MDBK), אאז"ו ו. איינער פון די הויפּט אַדוואַנידזשיז פון ניצן אַ סערום-פריי מיטל איז די פיייקייט צו מאַכן די מיטל סעלעקטיוו פֿאַר ספּעציפיש צעל טייפּס דורך סאַלעקטינג אַ צונעמען קאָמבינאַציע פון ​​גראָוט סיבות.די פאלגענדע טיש ליסטעד די אַדוואַנטידזשיז און דיסאַדוואַנטידזשיז פון סערום-פריי מעדיע.

מייַלע
פאַרגרעסערן קלעריטי
מער קאָנסיסטענט פאָרשטעלונג
גרינגער רייניקונג און דאַונסטרים פּראַסעסינג
אַקיעראַטלי אַססעסס צעל פונקציע
פאַרגרעסערן פּראָודאַקטיוואַטי
בעסער קאָנטראָל פון פיזיאַלאַדזשיקאַל ריאַקשאַנז
ימפּרוווד צעל מידיאַ דיטעקשאַן
כיסאָרן
צעל טיפּ ספּעציפיש מיטל פאָרמולע רעקווירעמענץ
דאַרפֿן העכער רייידזשאַנט ריינקייַט
סלאָודאַון אין וווּקס

2.2.1 ף מדרגה
רובֿ נאָרמאַל מאַממאַליאַן צעל שורות וואַקסן געזונט ביי pH 7.4, און די דיפעראַנסיז צווישן פאַרשידענע צעל שורות זענען קליין.אָבער, עטלעכע פארוואנדלען צעל שורות האָבן שוין געוויזן צו וואַקסן בעסער אין אַ ביסל אַסידיק סוויווע (pH 7.0 - 7.4), בשעת עטלעכע נאָרמאַל פיבראָבלאַסט צעל שורות בעסער אַ ביסל אַלקאַליין סוויווע (pH 7.4 - 7.7).ינסעקט צעל שורות אַזאַ ווי Sf9 און Sf21 וואַקסן בעסטער ביי pH 6.2.

2.2.2 קאָ2 מדרגה
דער וווּקס מיטל קאָנטראָלס די ף פון דער קולטור און באַפערז די סעלז אין דער קולטור צו אַנטקעגנשטעלנ ענדערונגען אין ף.יוזשאַוואַלי, דעם באַפערינג איז אַטשיווד דורך כּולל אָרגאַניק (למשל, HEPES) אָדער CO2-בייקאַרבאָנאַטע-באזירט באַפערז.ווייַל די ף פון די מיטל דעפּענדס אויף די יידל וואָג פון צעלאָזן טשאַד דייאַקסייד (CO2) און בייקאַרבאָנאַטע (HCO3-), ענדערונגען אין אַטמאַספעריק CO2 וועט טוישן די ף פון די מיטל.דעריבער, ווען ניצן אַ מיטל באַפערד מיט אַ CO2-בייקאַרבאָנאַטע-באזירט באַפער, עס איז נייטיק צו נוצן עקסאָגענאָוס CO2, ספּעציעל ווען קאַלטשערינג סעלז אין עפענען קולטור קיילים אָדער קאַלטשערינג פארוואנדלען צעל שורות אין הויך קאַנסאַנטריישאַנז.כאָטש רובֿ ריסערטשערז יוזשאַוואַלי נוצן 5-7% CO2 אין די לופט, רובֿ צעל קולטור יקספּעראַמאַנץ יוזשאַוואַלי נוצן 4-10% CO2.אָבער, יעדער מיטל האט אַ רעקאַמענדיד CO2 שפּאַנונג און בייקאַרבאָנאַטע קאַנסאַנטריישאַן צו דערגרייכן די ריכטיק ף און אָסמאָטיק דרוק;פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע, ביטע אָפּשיקן צו די ינסטראַקשאַנז פון די מיטל פאַבריקאַנט.

2.3 קאַלטיווייטינג פּלאַסטיקס
צעל קולטור פּלאַסטיקס זענען בנימצא אין אַ פאַרשיידנקייַט פון פארמען, סיזעס און סערפאַסיז צו פּאַסן פאַרשידן צעל קולטור אַפּלאַקיישאַנז.ניצן די צעל קולטור פּלאַסטיק ייבערפלאַך פירער און צעל קולטור קאַנטיינער פירן אונטן צו העלפן איר קלייַבן די רעכט פּלאַסטיק פֿאַר דיין צעל קולטור אַפּלאַקיישאַן.
זען אַלע Thermo Scientific Nunc צעל קולטור פּלאַסטיקס ( גאַנצע לינק)

2.4 טעמפּעראַטור
די אָפּטימאַל טעמפּעראַטור פֿאַר צעל קולטור דעפּענדס אין אַ גרויס מאָס אויף דער גוף טעמפּעראַטור פון דער באַלעבאָס פון וואָס די סעלז זענען אפגעזונדערט, און אין אַ ווייניקער מאָס אויף די אַנאַטאַמיקאַל ענדערונגען אין טעמפּעראַטור (למשל, הויט טעמפּעראַטור קען זיין נידעריקער ווי די פון סקעלעטאַל מוסקל) ).פֿאַר צעל קולטור, אָוווערכיטינג איז אַ מער ערנסט פּראָבלעם ווי אָוווערכיטינג.דעריבער, די טעמפּעראַטור אין די ינגקיאַבייטער איז יוזשאַוואַלי שטעלן אַ ביסל אונטער די אָפּטימום טעמפּעראַטור.

2.4.1 אָפּטימום טעמפּעראַטור פֿאַר פאַרשידן צעל שורות
רובֿ מענטש און מאַממאַליאַן צעל שורות זענען געהאלטן בייַ 36 ° C צו 37 ° C פֿאַר אָפּטימאַל וווּקס.
ינסעקט סעלז זענען קאַלטאַווייטאַד בייַ 27 ° C פֿאַר אָפּטימאַל וווּקס;זיי וואַקסן סלאָולי ביי נידעריקער טעמפּעראַטורעס און טעמפּעראַטורעס צווישן 27°C און 30°C.העכער 30 ° C, די ווייטאַלאַטי פון ינסעקט סעלז דיקריסאַז, אַפֿילו אויב עס קערט צו 27 ° C, די סעלז וועט נישט צוריקקריגן.
אַוויאַן צעל שורות דאַרפֿן 38.5 ° C צו דערגרייכן מאַקסימום וווּקס.כאָטש די סעלז קענען זיין געהאלטן בייַ 37 ° C, זיי וועלן וואַקסן סלאָולי.
צעל ליניעס וואָס זענען דערייווד פון קאַלטבלוטיק אַנימאַלס (אַזאַ ווי אַמפיביאַנז, קאַלט וואַסער פיש) קענען דערלאָזן אַ ברייט טעמפּעראַטור קייט פון 15°C צו 26°C.